摘要：【目的】探究黃花蒿沒藥醇合酶第296位氨基酸突變抑制環(huán)化反應(yīng)的機(jī)制。【方法】利用Quik Change R Multi Site-Directed Mutagenesis的方法將黃花蒿沒藥醇合酶的296位氨基酸殘基由蘇氨酸突變成異亮氨酸。原核表達(dá),蛋白純化后測(cè)定其催化特異性?！窘Y(jié)果】黃花蒿沒藥醇合酶T296I體外催化（2E,6E）-法尼基焦磷酸主產(chǎn)物為非環(huán)化的法尼烯;但是將T296I蛋白與中間體（3R,6E）-橙花叔醇焦磷酸一起孵育時(shí)可生成環(huán)化的主產(chǎn)物α-bisabolol,野生型酶的天然產(chǎn)物?！窘Y(jié)論】黃花蒿沒藥醇合酶T296I點(diǎn)突變進(jìn)一步證明氨基酸殘基的空間體積和立體化學(xué)是自然環(huán)化反應(yīng)起始的控制關(guān)鍵,其位阻效應(yīng)能夠抑制法尼基焦磷酸向橙花叔醇焦磷酸轉(zhuǎn)化。