摘要：目的為提高T細胞的感染率,探究高滴度慢病毒的制備、保存及感染T細胞的較佳條件。方法本研究使用二代和三代慢病毒包裝系統(tǒng)搭配二代和三代慢病毒載體、相同載體不同啟動子制備慢病毒濃縮后,用不同保存條件的慢病毒感染Jurkat細胞和不同活化程度的T細胞,然后用流式細胞儀檢測,進一步計算出病毒滴度和感染率。結果三代慢病毒包裝系統(tǒng)搭配三代慢病毒載體pLVX-EGFP包裝慢病毒滴度較高;EF-1a啟動子的載體優(yōu)于CMV啟動子的載體;病毒在4℃存儲1d和在-80℃凍融1次滴度下降低于10%,在4℃存儲2d以上和在-80℃凍融兩次以上滴度下降超過35%;T細胞活化后才能被慢病毒感染;T細胞活化后較佳感染時相點為活化后24h。結論EF-1a啟動子的載體優(yōu)于CMV啟動子的載體;病毒不要反復凍融;T細胞活化后24h轉導慢病毒轉到效率較高。