CRISPR/Cas9介導下高效敲除SQSTM1/p62基因的Hela細胞模型的建立
作者：姚建鳳; 李明; 黃榮富; 彭維林; 林建生; 連建烽; 楊曉煜; 鄭鳴 泉州市婦幼保健院兒童醫(yī)院; 泉州362000; 湖南醫(yī)藥學院; 懷化418000; 福建醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院; 泉州362000; 附屬福州市第一醫(yī)院; 福州350009; 基礎醫(yī)學院; 福州350108
摘要：目的:探討針對p62雙sgRNA向導CRISPR/Cas9基因編輯效率。方法:采用CRISPR/Cas9基因編輯技術成功敲除p62基因,通過細胞有限稀釋法和嘌呤霉素篩選,免疫印跡法驗證雙sgRNA和單sgRNA向導的基因編輯成功率;流式細胞儀驗證p62缺失對Hela細胞凋亡的影響。結果:免疫印跡分析得出雙sgRNA導向的p62敲除效率高于單sgRNA導向的敲除,靶序列測序比對分析確認p62編碼基因發(fā)生大片段缺失突變。H2O2處理穩(wěn)定敲除的Hela細胞系顯示,p62基因敲除能明顯抑制Hela細胞H2O2誘導的早期細胞凋亡。結論:成功建立了p62敲除的Hela細胞系,雙sgRNA向導的CRISPR/Cas9基因編輯體系可能是一種更有效的編輯工具。
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