利用Red重組系統(tǒng)敲除鮑曼不動(dòng)桿菌 asaA 基因
作者：李磊; 王一諾; 鄒清華 北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系; 北京100191; 全國(guó)醫(yī)學(xué)教育發(fā)展中心; 北京10019
摘要：目的利用Red重組系統(tǒng)敲除鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC17978的asaA。方法設(shè)計(jì)上下游引物中包含asaA的同源序列,并以pKD4質(zhì)粒為模板,擴(kuò)增含有卡那霉素抗性基因的DN段。將該片段轉(zhuǎn)化于表達(dá)重組酶的17978感受態(tài)細(xì)胞中,在卡那霉素篩選壓力下,得到經(jīng)兩次同源雙交換的具有卡那霉素基因標(biāo)記的突變菌株。隨后,在重組酶的作用下將抗性基因去除,最終得到無抗性基因標(biāo)記的突變菌株ΔasaA。結(jié)果通過該重組系統(tǒng),首先將卡那霉素抗性基因的DN段替換了基因組中asaA的DN段,然后將卡那霉素抗性基因的DN段消除,最終獲得了asaA缺失的突變體。結(jié)論通過Red重組系統(tǒng)為鮑曼不動(dòng)桿菌中其他基因的缺失突變提供方法與思路。
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微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展雜志
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