摘要：目的高致病性H5N1亞型流感病毒可感染人,并不斷衍生出多個新的基因譜系,存在著大規(guī)模流行的可能性。我國現(xiàn)有的商品化疫苗無法對不同譜系的H5N1流感病毒感染提供有效的保護。病毒樣顆粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗具有良好的免疫原性和安全性,成為近年研究的熱點。本研究旨在建立H5亞型禽流感病毒通用型病毒樣顆粒疫苗的制備方法。 方法將優(yōu)化的H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亞型流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e(5個M2e)/HL5M2e(5M2e替代HA的頭部嵌入HLHA)、NP基因和M1基因分別插入pFast-BacDual載體,得到相應(yīng)的重組供體。然后將重組供體轉(zhuǎn)化至含Bacmid的DH10Bac感受態(tài)細胞中,獲得含有目的基因的重組桿粒。 結(jié)果酶切和PCR鑒定表明成功構(gòu)建了含目的基因的重組桿粒Bacmid-(HLHA/5M2e/HL5M2e、NP、M1)。將重組桿粒轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細胞,IFA試驗和Western blot試驗皆證實,優(yōu)化的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP基因和M1基因編碼的蛋白均獲得表達。透射電子顯微鏡觀察VLPs轉(zhuǎn)染Sf9細胞上清的濃縮液中,有球形結(jié)構(gòu)和100nm左右典型VLPs存在。 結(jié)論在Sf9昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)中成功表達H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亞型禽流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP和M1蛋白,并組裝成3種VLPs,為進一步研究流感病毒的VLPs疫苗奠定了基礎(chǔ)。