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Survivin mRNA轉(zhuǎn)染樹突細胞誘導特異性抗胰腺癌免疫反應的體外研究

作者:郭曉鐘 陳江 沈陽軍區(qū)總醫(yī)院消化科 110016

摘要:目的研究人胰腺癌survivin mRNA轉(zhuǎn)染樹突細胞(DC)誘導的特異性抗腫瘤免疫反應,為DC疫苗治療胰腺癌提供實驗依據(jù)。方法自樣本外周血單核細胞中分離和培養(yǎng)DC。體外轉(zhuǎn)錄和PCR擴增survivin mRNA后使用電穿孔法將其轉(zhuǎn)染DC。采用實時定量PCR技術檢測不同時間點DC中survivin的表達。用四甲基偶氮苯唑鹽(MTT)法檢測轉(zhuǎn)染前后DC存活率變化。采用^51Cr標準細胞毒實驗檢測轉(zhuǎn)染survivin mRNADC誘導的特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應。使用γ-干擾素(IFN—γ)酶聯(lián)免疫法檢測轉(zhuǎn)染survivin mRNADC誘導的CTL活化反應。結果survivin mRNA轉(zhuǎn)染后48hDC中survivin mRNA表達水平最高(46.09±6.57)。轉(zhuǎn)染后DC存活率穩(wěn)定在80%左右。轉(zhuǎn)染survivinmRNADC可有效誘導HLA-A2^+/survivin^+特異性CTL免疫反應。胰腺癌Capan-2細胞與對照組SCL-1細胞刺激survivin特異性CTL的24hIFN-7釋放量分別為(28.79土5.70和(25.12±2.13)U/ml,差異無統(tǒng)計學意義(P=0.761)。結論人胰腺癌survivin mRNA體外轉(zhuǎn)染DC可誘導CTL產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫。

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